產(chǎn)品名稱： 人過敏毒素/補體片斷4（C4a）ELISA檢測試劑盒

貨號： ZK-H660

英文名稱:  Complement fragment 4a,C4a ELISA Kit

品牌：子科生物ZIKER；

檢測方法：酶聯(lián)免疫分析檢測法；

規(guī)格：48T/96T；

包裝：盒；

有效期：6個月；

保存溫度： 2-8℃;

應用范圍：僅供科研研究實驗使用，不可用于臨床診斷使用；

可檢測樣品形式：血清/血漿/組織勻漿/細胞培養(yǎng)上清/相關生物液體。

一、檢測范圍、 OD值：具體請咨詢在線客服 ，或者來電索要詳細說明書！

二、需自備試劑和器材

1． 標準規(guī)格酶標儀。

2． 自動洗板機。

3.  37℃恒溫箱。

4． 系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時，最好用多通道移液器。

5． 使用中性 PBS 或 TBS 作為洗滌液。

6  蒸餾水。

7. 吸水紙。

三、樣品的準備和保存

樣品如果不立即分析，應分裝后冷凍保存，且避免反復凍融。

細胞培養(yǎng)、組織勻漿、體液——離心去除沉淀，立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。

1.  血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

3.  細胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?/span>2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

5.  保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，超過2個月凍存于-80℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

四、操作注意事項

1.  試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再使用。

2.  實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

3.  濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白；按照說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋5倍，最終結(jié)果乘以5才是樣本實際濃度。

4.  嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。

5.  所有液體組分使用前充分搖勻。

五、洗板方法

1、手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。

2、自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

六、實驗詳細操作程序

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；樣本孔加待測樣本50μL。

3.  樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。

4.  除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

七、結(jié)果判斷:

繪制標準曲線：在Excel工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應OD值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。