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大鼠血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)ELISA試劑盒
大鼠血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)ELISA試劑盒

服務(wù):購買試劑盒子科生物提供免費代測

大鼠血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)ELISA試劑盒

 詳情說明

產(chǎn)品名稱:大鼠血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACEELISA試劑盒

貨號: ZK-R3702

英文名稱:Rat Angiotensin converting enzyme,ACE ELISA Kit

品牌:子科生物ZIKER;

檢測方法:酶聯(lián)免疫分析檢測法;

規(guī)格:48T/96T

包裝:盒;

有效期:6個月;

保存溫度 2-8;

應(yīng)用范圍:僅供科研研究實驗使用,不可用于臨床診斷使用

可檢測樣品形式:血清/血漿/組織勻漿/細(xì)胞培養(yǎng)上清/相關(guān)生物液體。

 

一、檢測范圍、 OD值:具體請咨詢在線客服 ,或者來電索要詳細(xì)說明書

 

二、需自備試劑和器材

1. 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀。

2. 自動洗板機。

3.  37℃恒溫箱。

4. 系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭,一次檢測樣品較多時,最好用多通道移液器。

5 使用中性 PBS TBS 作為洗滌液。

6  蒸餾水。

7. 吸水紙。

 

三、樣品的準(zhǔn)備和保存

樣品如果不立即分析,應(yīng)分裝后冷凍保存,且避免反復(fù)凍融。

細(xì)胞培養(yǎng)、組織勻漿、體液——離心去除沉淀,立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。

1.  血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2.  血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

3.  細(xì)胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBSPH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

5.  保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,超過2個月凍存于-80℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

 

四、操作注意事項

1.  試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶,這屬于正?,F(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再使用。

2.  實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。

3.  濃度為0S0號標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對照或者空白;按照說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋5倍,最終結(jié)果乘以5才是樣本實際濃度。

4.  嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時間、加液量及順序進行溫育操作。

5.  所有液體組分使用前充分搖勻。

五、洗板方法

1手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。

2、自動洗板機:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。

 

六、實驗詳細(xì)操作程序

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;樣本孔加待測樣本50μL。

3.  樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加。

4.  除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機洗板)。

6.  每孔加入底物AB50μL,37℃避光孵育15min

7.  每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。

 

七、結(jié)果判斷:

繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線:在Excel工作表中,以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo),對應(yīng)OD值作縱坐標(biāo),繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值。

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