產(chǎn)品名稱： 豬干擾素β(IFNβ) ELISA試劑盒

貨號： ZK-P6468

英文名稱: porcine Interferon Beta (IFNb) ELISA Kit

品牌：子科生物ZIKER；

檢測方法：酶聯(lián)免疫分析檢測法；

規(guī)格：48T/96T；

包裝：盒；

有效期：6個月；

保存溫度： 2-8℃;

應(yīng)用范圍：僅供科研研究實(shí)驗(yàn)使用，不可用于臨床診斷使用；

可檢測樣品形式：血清/血漿/組織勻漿/細(xì)胞培養(yǎng)上清/相關(guān)生物液體。

一、檢測范圍、 OD值：具體請咨詢在線客服 ，或者來電索要詳細(xì)說明書！

二、需自備試劑和器材

1． 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀。

2． 自動洗板機(jī)。

3.  37℃恒溫箱。

4． 系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時，最好用多通道移液器。

5． 使用中性 PBS 或 TBS 作為洗滌液。

6  蒸餾水。

7. 吸水紙。

三、樣品的準(zhǔn)備和保存

樣品如果不立即分析，應(yīng)分裝后冷凍保存，且避免反復(fù)凍融。

細(xì)胞培養(yǎng)、組織勻漿、體液——離心去除沉淀，立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。

1.  血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

3.  細(xì)胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

5.  保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，超過2個月凍存于-80℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

四、操作注意事項(xiàng)

1.  試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶，這屬于正常現(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再使用。

2.  實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

3.  濃度為0的S0號標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對照或者空白；按照說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋5倍，最終結(jié)果乘以5才是樣本實(shí)際濃度。

4.  嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。

5.  所有液體組分使用前充分搖勻。

五、洗板方法

1、手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。

2、自動洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

六、實(shí)驗(yàn)詳細(xì)操作程序

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；樣本孔加待測樣本50μL。

3.  樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。

4.  除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

七、結(jié)果判斷:

繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在Excel工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。

發(fā)表文章文獻(xiàn)：
p53 mediated IFN-β signaling to affect viral replication upon TGEV infection.
Li Ding a,1, Jiawei Li a,1, Weihao Li a, Zhenhua Fang b, Na Li a, Qiqi Guo a, Haoyue Qu a, Dan Feng a,Jiangyue Li a, Meiling Hong a. Veterinary Microbiology 227 (2018) 61–68.