BCA蛋白定量試劑盒

英文名稱：BCA Protein Assay Kit

別    名：BCA Kit; bicinchoninic acid;   
規(guī)格：30ml  50ml  100ml

保存條件：Store at -20℃.

產(chǎn)品介紹 ：

蛋白質(zhì)定量是蛋白質(zhì)研究的基礎(chǔ)工作之一。BCA (bicinchoninic acid)是理想的蛋白質(zhì)定量方法；是當(dāng)前比Lowry法更優(yōu)越的專用于檢測總蛋白質(zhì)含量的產(chǎn)品。該方法以快速靈敏、穩(wěn)定可靠，對不同種類蛋白質(zhì)檢測的變異系數(shù)非常小而倍受專業(yè)人士的青睞。BCA法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響。在組織細(xì)胞裂解實(shí)驗(yàn)中，常用濃度的去垢劑SDS，Triton X-100，Tween不影響檢測結(jié)果，但受螯合劑(EDTA，EGTA)、還原劑（DTT，巰基乙醇）和脂類的影響。實(shí)驗(yàn)中，若發(fā)現(xiàn)樣品稀釋液或裂解液本身背景值較高，可試用Bradford蛋白濃度測定試劑盒。該產(chǎn)品不受此影響，因此與之配合使用，可免除您實(shí)驗(yàn)中的許多煩惱。

基本原理：堿性條件下，蛋白將Cu2+還原為Cu+， Cu+與BCA試劑形成紫顏色的絡(luò)合物，測定其在562nm處的吸收值，并與標(biāo)準(zhǔn)曲線對比，即可計算待測蛋白的濃度。
BCA試劑的蛋白質(zhì)測定范圍是10－2000ug/ml

使用說明：
1. 配制工作液: 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品數(shù)量，按體積比A ：B （50：1）配制適量BCA工作液，充分混勻。BCA工作液室溫24小時內(nèi)穩(wěn)定。
2. 稀釋標(biāo)準(zhǔn)品：取10微升標(biāo)準(zhǔn)品用PBS稀釋至100ul（標(biāo)準(zhǔn)品一般可用PBS稀釋），使終濃度為0.5mg/ml。將標(biāo)準(zhǔn)品按0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20ul加到96孔板的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品孔中，加PBS補(bǔ)足到20ul。
3. 加適當(dāng)體積樣品到96孔板的樣品孔中，補(bǔ)加PBS到20ul。
4. 各孔加入200ul BCA工作液，37℃放置30分鐘。
5. 冷卻到室溫，用酶標(biāo)儀562nm測定OD值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出蛋白濃度。

注意事項：
1. 在低溫條件或長期保存出現(xiàn)沉淀時，可攪拌或37℃溫育使溶解, 如發(fā)現(xiàn)細(xì)菌污染則應(yīng)丟棄。
2. 樣品中若含有EDTA、EGTA、DTT、硫酸銨、脂類會影響檢測結(jié)果，請試用Bradford蛋白濃度測定試劑盒；高濃度的去垢劑也影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可用TCA沉淀去除干擾物質(zhì)。
3．要得到更為精確的蛋白濃度結(jié)果，每個蛋白梯度和樣品均需做復(fù)孔, 每次均應(yīng)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
4．當(dāng)試劑A和B混合時可能會有渾濁，但混勻后就會消失，工作液在密閉情況下可保存1周。
5．需準(zhǔn)備37℃水浴或溫箱、酶標(biāo)儀或普通分光光度計，測定波長為540-595nm之間，562nm最佳。酶標(biāo)儀需與96孔酶標(biāo)板配套使用。使用分光光度計測定蛋白濃度時，試劑盒測定的樣品數(shù)量會因此而減 少。使用溫箱孵育時，應(yīng)注意防止因水粉蒸發(fā)影響檢測結(jié)果。