中文名稱:5×蛋白上樣緩沖液(含巰基還原劑)
英文名稱:SDS-PAGE loading buffer,5×(with β-Mercaptoethanol)
規(guī)格 :5ml
保存條件:Store at -20 °C for one year.
產品介紹:
本產品適用于SDS-PAGE(SDS變性聚丙烯酰胺凝膠電泳)時作蛋白質上樣用。其主要成份為SDS,β-巰基乙醇,溴酚藍,緩沖鹽溶液等。 SDS可與蛋白質結合使蛋白質-SDS復合物上帶有大量的負電荷,這時蛋白質本身的電荷完全被SDS掩蓋,消除了各種蛋白質本身電荷的差異,SDS還可以斷開分子內和分子間的氫鍵,破壞蛋白質分子的二級和三級結構;β-巰基乙醇可以斷開半胱氨酸殘基之間的二硫鍵,破壞蛋白質的四級結構,消除了蛋白結構之間的差異。最終無電荷及結構上差異的蛋白(亞單位),電泳速度只是與其分子量大小有關;溴酚藍用作電泳時的指示劑,可大概指示電泳結束的時間。
使用介紹:
1. 按每4微升蛋白樣品加入1微升蛋白上樣緩沖液的比例,混合蛋白樣品和蛋白上樣緩沖液(5X)。
2. 混勻后,100℃水浴加熱3-5分鐘,使蛋白充分變性。
3. 冷卻到室溫后,10000-14000rpm離心2-5分鐘,取上清直接上樣電泳即可。
4. 通常電泳時染料到達膠的底端附近(0.5-1cm)即可停止電泳。
注意事項:
1. 上樣緩沖液分為還原型和非還原型兩種,還原型上樣緩沖液中含一定量的DTT或巰基乙醇,有輕微刺激性氣味,較易區(qū)分。
2. 還原型上樣緩沖液中的巰基可使蛋白分子的鏈內二硫鍵和鏈間二硫鍵斷裂,使通過二硫鍵連接的各亞單位彼此分離,在電泳凝膠上顯現多個蛋白條帶,選購和使用時請務必注明,仔細區(qū)分。
3. 本試劑因含β-巰基乙醇,有一定的毒性,為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
4. 蛋白上樣緩沖液含有溴酚藍指示劑,PH值受保存溫度影響,在低溫凍存狀態(tài)下,溶液可能會呈現深棕色,不影響產品使用。