?組織總鐵離子含量檢測試劑盒

貨號：ZK-PL3974

規(guī)格：100次 300次

描述：

鐵是人體必需的元素之一，對人體的新陳代謝和身體健康具有重要作用，血液中鐵的含量不足，就會造成缺鐵性貧血。鐵存在于人體所有的細胞內(nèi)，各組織、器官包括各內(nèi)分泌腺都含有鐵。肝臟、脾臟和肺組織內(nèi)含量較為豐富。成人體內(nèi)含鐵3～5克，大部分都以蛋白質(zhì)復合物形式存在，極少部分以離子的形態(tài)存在。本試劑盒采用亞鐵嗪比色法可以定量動物實體組織中鐵離子，線性范圍5~300uM。產(chǎn)品包括標準品和空白對照，本試劑盒可進行100個樣品的檢測。

原理：

鐵與蛋白結(jié)合成復合物，在酸性介質(zhì)中鐵從復合物中解離出來，再被還原劑還原成二價鐵，并與亞鐵嗪生成紫紅色化合物，在540-580nm處可比色測定。 其反應如下圖所示：

組成：

1. 組織裂解液： 60 ml

2. 緩沖液： 5ml

3. 檢測劑： 3ml

4. 標準品： 1ml

5. 稀釋用液： 20ml

儲存：4℃保存，6個月有效。

適用范圍：該試劑盒可用于動物實體組織中鐵離子定量檢測。

用戶自備：4.5%高錳酸鉀溶液5ml。（0.225g高錳酸鉀溶解于5ml純水中）

操作步驟：

1. 樣品準備：

離心管精確稱重，加入組織塊后再稱重，二者相減(即減量稱重法)計算組織重量(約20mg-50mg)。建議按比例每50mg組織加200μl-400μl裂解液。用電動高速勻漿器或手動玻璃勻漿器破碎組織（不推薦超聲方法，因其不能完全和均勻破碎。應根據(jù)預實驗調(diào)整初始的組織加入量）。勻漿后置于搖床裂解2h，之后室溫12000rpm離心5分鐘，上層清液即可用于測定。

2. 標準品的稀釋：用試劑盒提供的稀釋用液將3mM 的標準品母液稀釋為：300 uM、150uM、75uM、37.5uM、18.75uM、9.38uM、4.69uM。注意倍比稀釋并設置0濃度對照反應管。

3. 將緩沖液與4.5%高錳酸鉀溶液按1:1混勻，稱為混液A。

4. 參考下表使用1.5ml離心管，設置空白對照管、標準品管和樣品管。如果樣品中的鐵元素含量過高，用裂解液適當稀釋后再進行測定。

5. 混勻，60℃孵育1h。

6. 冷卻至室溫，將管蓋與管壁上的液滴離心入管底。

7. 加入30ul鐵離子檢測劑，混勻，室溫孵育，30min。此步可能產(chǎn)生絡合物沉淀，用移液器輕輕吹打即可溶解，若沉淀不溶，12000rpm離心5分鐘，取上層清液即可。

8. 取200ul于96孔板，在550nm測定吸光度。如果不能測定550nm，也可以在540nm~580nm范圍內(nèi)檢測。

9. 繪制標準曲線并計算鐵離子濃度。

說明：

1. 本試劑盒不受錳離子、鎂離子、鎳離子和鋅離子等的干擾。

3. 所測樣本的值高于標準曲線的上限，應稀釋樣品后重新測定。

4. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作，檢測試劑有腐蝕性，請小心操作，若不慎沾到皮膚上請馬上用清水沖洗干凈。

5. 該試劑盒僅供科學研究使用。